ECA发布了《欧洲药典》系统适用性试验Q&A，我们整理了“系统适用性试验（SST）与高效液相色谱（HPLC）方法故障排除”培训中的问答内容，包括系统适用性可接受标准、系统重复性、系统精密度、保留时间偏差、长分析序列下 SST 的合理执行方案、SST 连续失败的调查启动节点与依据、长时分析中 SST 及标准品的重复频次、含量与有关物质分析中平行样品的精密度评估方法，以及色谱柱平衡进样的实操建议等。以下为具体问答内容：

1.1《欧洲药典》2.2.46章近期新增了系统适用性的可接受标准（如拖尾因子）。我们实验室有一个已验证的成品含量检测方法，该方法中未评估拖尾因子。除已建立方法的标准外，我们是否应开始评估《欧洲药典》规定的这些标准？

《欧洲药典》2.2.46章列出了所有可定义的相关系统适用性试验（SST）参数。但建议制定相关依据（例如针对相应分析目标谱图（ATP）的定义），明确哪些SST参数与特定分析流程真正相关。例如，若分离质量不存在关键影响，可不检测拖尾因子，而是采用色谱分离度等其他SST参数。《欧洲药典格式指南》建议采用一项或多项SST参数作为通用信息。

1.2 离子色谱法与液相色谱法的系统适用性标准是否相同？

相同，二者原理一致。

1.3 采用气相色谱法测定残留溶剂时，是否需要评估系统重复性？

系统重复性在2.2.46章中有通用说明，该要求同样适用于气相色谱法。一种做法是在“毒理学关注阈值”水平条件下评估系统重复性。此外，也可通过信噪比（S/N）、色谱分离度和峰形（拖尾因子）来定义系统适用性试验（SST）的标准（如针对顶空气相色谱法）。在新的《欧洲药典格式指南》中，气相色谱法相关的系统适用性试验（SST）说明部分也引用了2.2.46章的内容。

1.4 采用液相色谱法测定有机杂质/相关物质时，系统精密度评估是否为强制性要求？《欧洲药典》中无相关提及（仅USP有规定）。

《欧洲药典》对系统精密度有通用描述。尽管根据《欧洲药典》规定，系统精密度评估可能并非强制性要求，但它仍是一项优良的SST参数，尤其在接近定量限的情况下，可用于检验分析流程的变异性。

1.5 培训中提到，例如可将保留时间定义为2.0分钟±0.2分钟，对应10%的保留时间变异。那么，在高效液相色谱（HPLC）鉴别试验中，样品与工作标准品的保留时间差异最大为10%，这种情况是否可接受？若可接受，应遵循哪项指南？

目前尚无针对鉴别试验等场景中保留时间变异性的专项指南。培训中提及的案例仅为一种参考方法，保留时间的变异性需在依据文件（甚至分析目标谱图（ATP））中进行合理性说明。

2.1 针对分析序列运行时长较长的情况，你提到要“重复进行系统适用性测试（SST）”。那么，例如在序列开始时进行5次系统适用性测试进样，仅在序列末尾进行1次标准品进样，并以此计算相对标准偏差（%RSD），这种做法是否可行？

对于“序列开始时进行5次系统适用性测试进样、末尾进行1次进样”的方案，我有以下几点顾虑：

系统适用性测试（SST）合格前，不得启动样品分析工作。这意味着必须先计算前5次进样结果的相对标准偏差（RSD）。因此，第6次系统适用性测试进样无法纳入前5次进样的结果计算，因为样品分析在第6次进样前就已经启动。

否则，单次系统适用性测试（SST）进样不具备实际意义，因为无法据此计算相对标准偏差（RSD）。

针对这类长时长分析序列的情况，我建议在序列开始时执行系统适用性测试（SST），必要时可在序列中途再次执行。

不过，最优方案是在启动样品分析前完成系统适用性测试（SST），并通过在分析过程中额外注入对照标准品来监控整个分析序列。对照标准品可在分析序列中按固定间隔进样。

2.2 若系统适用性测试（SST）连续失败，例如已失败2次且第3次尝试仍未通过，应在何时停止测试并启动正式调查？是否有相关指导原则或法规文件对该情况作出规定？此类调查的处理方式是否应参照检验结果超标（OOS）调查的第一阶段流程？

每次系统适用性测试（SST）失败后均需开展调查，且应在首次测试失败后立即启动！

FDA的《检验结果超标（OOS）处理指导原则》对此作出如下描述：“若对照标准品的响应信号表明分析系统运行异常，则可疑时间段内采集的所有数据均需明确标识，且不得使用。应先查明系统故障原因，若条件允许需予以纠正，之后再决定是否采用可疑时间段之前采集的任何数据。”

此类调查与检验结果超标（OOS）后的调查并不完全相同（但需注意，若部分或全部样品分析是在系统适用性测试（SST）不合格的状态下完成的，则调查流程需相应调整）。

2.3 若样品分析时长较长，系统适用性测试（SST）应多久重复一次？此外，标准品进样是否也需要重复进行？

对于超时长色谱分析（例如24小时），可在分析过程中重复进行系统适用性测试（SST）。不过，在完成一定次数的样品进样后注入对照标准品，监控效果可能更佳。需注意的是，若在色谱分析结束时进行的系统适用性测试（SST）未通过，则本次分析所得数据均不可使用（详见问题2.2）。

2.4 在含量测定和有关物质分析中，针对平行制备的两份样品（每份样品仅进样一次），应如何评估其精密度或结果一致性？

在方法验证实验中，评估取样策略的最佳方式是通过改变分析人员、实验日期、使用设备等因素，开展中间精密度试验。此外，建议每份样品制备后至少进样3次，以确定进样重复性的变异程度。基于上述试验数据，可确定合理的样品制备份数及每份样品的进样次数（该结论同样适用于“平行制备两份样品且每份仅进样一次”的情况）。

该策略适用于含量测定，同时也适用于杂质的检测（例如通过加标对照品的方式进行验证）。

2.5 在我们实验室，会采用所谓的“首次进样”来平衡色谱柱。该次进样通常使用缓冲液或溶剂，仅用于色谱柱平衡，相关数据不纳入结果计算。但目前我们缺乏明确证据证明该操作的有效性，请问你对这种做法有何看法？

通常情况下，首次进样会使用空白溶液，目的是排除可能对分析结果产生干扰的因素（例如在杂质检测项目中）。空白溶液进样的数据虽不用于系统适用性测试（SST）的计算，但可用于排查系统中引入的杂质（例如流动相杂质）。针对此类情况，可设定空白峰的峰面积限度，以避免空白峰对后续分析物积分结果造成影响。